酶联免疫吸附试验(ELISA)是实验室常用的检测方法，因为它操作简单，可以简单地回答样品中有多少蛋白质、肽和抗体的基本问题。

而这个简单分析方法的核心就是标准曲线。没有它，我们的实验就变成了二元“是/否”测试。有了它，我们可以深入研究生物反应的细节。

有多少人对ELISA的标准曲线拟合很头疼？！其实不仅仅是ELISA的标准曲线拟合，其他各种相关的实验数据分析都可以用ELISA Calc进行分析。让我们跟随边肖，看看如何通过四个步骤轻松制作ELISA标准曲线和数据计算！

第一步

在Excel表格中输入浓度和OD值。

第二步

将数字部分粘贴到ELISA Calc中。

第三步

选择回归/拟合模型

拟合方法介绍:线性回归(常用)、二次回归(常用)、三次回归、Logit-log线性回归、Logistic曲线拟合1、Logistic(四参数)(常用)、Logistic(五参数)、Hill曲线拟合、指数曲线拟合、三次样条插值。

要不要扣背景？取对数？

1。许多套件可以同时以多种方式安装；

2。除了套件推荐的试衣方式，也可以尝试其他试衣方式；

3。双抗体夹心法可以选择三种:直线、二次、四参数；扣除O孔背景后可以直接拟合或对数。

4。可采用单对数或双对数取单数；单对数就是x值(浓度值取对数)；

5。竞争法采用Logit-log拟合方法；竞争法也可以拟合四参数或五参数。

点击“回归/拟合”

拟合结果判断:

先采用线性拟合，因为od值超过2.0线性不好。可以点击“数据输入”更改为:二次曲线法或四参数；或背景扣除线性回归、二次曲线法或四参数；

背景推演的做法:

背景扣除和对数的选择方法

点击“回归方程”复制粘贴到其他文件中。

方程的拟合质量也可以通过看方程来检验，主要看r 2的值。越接近1，拟合效果越好。

第四步

从y计算X。

1。从Excel表中粘贴样本反应值数据，点击“粘贴”；

2。点击“计算”；

3。获取数据；

4。点击复制，就可以粘贴到Excel中，得到计算出来的数据。

需要注意的问题

1。二次曲线计算结果会有两个解，其中一个偏差大的要舍弃。

2。竞争法采用的是Log-logit拟合方法，竞争法也可以用四个或五个参数进行拟合。

3。样品的浓度等指标都是根据标准曲线计算出来的，所以首先做好标准曲线比做正式实验更重要，否则后面的实验结果就无从谈起。

4。设置标准曲线样品的标准浓度范围要有比较大的跨度，并且要覆盖你要检测的实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围内，包括上限和下限。对于S形标准曲线，尽量使实验样品的浓度在中间斜率最陡的一段，即曲线几乎呈直线。

5。标准曲线中标准样品的浓度最好用二倍稀释法配制，酶联免疫试剂盒可以保证标准样品的浓度不会出现较大偏差。

6。测试标准样品时，应按浓度递增的顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确度。

7。标准曲线的样本数一般为7点，但至少要保证5点。

8。标准曲线的相关系数根据不同的实验要求而不同，但一般来说，相关系数r至少要大于0.98，对于某些实验，至少要达到0.99甚至0.999。

要画出一条合格的标准曲线，并利用好它，真的不容易。所有的条件都必须考虑在内，也就是说，质量控制应该在绘制标准曲线时进行。只有这样才能得到理想的标准曲线。

文章来自江来生物(shjianglai666)。

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